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荧光定量Q-PCR检测的取样及运输须知
发布时间:2019-03-07   点击次数:528次
   荧光定量Q-PCR检测的取样及运输须知
  荧光定量Q-PCR检测是利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
  它的扩增曲线反应了Q-PCR动态进程的曲线。
  荧光阈值:前15个循环信号作为荧光本底信号,荧光阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,如果手动设置则设置大于荧光背景值和阴性对照的荧光高值,进入指数期的初阶段。
  CT值:PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
  Q-pcr的取样及运输事项:
  一、细胞收集及保存
  1.贴壁细胞胰酶消化后900转5min离心至管底(非贴壁细胞直接离心),弃上清,将细胞冻存与-80度长期保存,-20度,暂时保存。若用于Q-PCR尽量使用灭菌无RNA酶离心管,RNA样本保存液中-80度长期保存。
  2.组织样本取样后立即-80或者液氮保存。后续用于Q-PCR的取样后立即存于液氮或者-80度环境中,或者放于有RNA样本保存液的灭菌无RNA酶离心管中-80度保存。
  二、样本运输
  短时2h左右冰袋或者液氮运输,干冰(干冰可以维持-70度)密封运输。
  三、样本编号
  样本标号清晰,须提供样本清单。
  病理实验取样及实验注意事项:
  1.动物组织提取后(玉米粒大小即可)迅速保存于4%多聚甲醛中固定,管体标号,组织块尽量少带血液,或可以用多聚甲醛将样本稍作清洗,常温保存,常温运输。做电镜的样本由2.5%戊二醛固定于15ml离心管内,样本直径小于2mm,常温保存常温运输。
  2.细胞样本制作成爬片后PBS浸润保存与细胞培养板内,密封常温运输。做电镜的细胞离心收集好后2.5%戊二醛固定,常温运输。
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