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腺病毒包装

更新时间:2021-12-21

简要描述:

腺病毒包装(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

       腺病毒包装(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

       重组腺病毒(AdV)是人血清5型腺病毒(Ad5),一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。腺病毒缺失了早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如293A细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。

       

腺病毒包装特点:

1)几乎可以感染所有类型的细胞。


2)可以获得复制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。


3)病毒滴度高,产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL,能有效的进行增殖。

注:plaque forming unit/ml,空斑形成单位,感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。


4)腺病毒载体感染宿主的范围比较广,制备容易,操作简单。


5)感染细胞时,不整合到染色体中,不存在激活致癌基因或插入突变等危险,生物安全性高。


腺病毒包装简要流程  :

1)构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体。


2)采用 PacI 消化纯化的质粒。


3)消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞,收获细胞以制备病毒粗提液。


4)将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。


5)分装,-80℃保存。


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