载体构建克隆

　　载体构建克隆（vectorconstruction）是分子生物学研究常用的手段之一。依赖于限制性核酸内切酶、DNA连接酶和其它修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。载体构建主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。

　　载体构建克隆实验步骤：

　　1）引物设计，PCR扩增目的片段

　　2）酶切目的片段与载体

　　3）连接或重组

　　4）载体构建转化

　　5）涂板

　　6）挑取克隆酶切或PCR鉴定

　　7）载体构建测序验证

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