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载体构建克隆

更新时间:2021-12-15

简要描述:

载体构建克隆(vectorconstruction),为把DNA分子运送到受体细胞中去,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的基因片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。载体构建即是构建含外源DNA的质粒。

  载体构建克隆(vectorconstruction)是分子生物学研究常用的手段之一。依赖于限制性核酸内切酶、DNA连接酶和其它修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。载体构建主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。

  载体构建克隆实验步骤:

  1)引物设计,PCR扩增目的片段

  2)酶切目的片段与载体

  3)连接或重组

  4)载体构建转化

  5)涂板

  6)挑取克隆酶切或PCR鉴定

  7)载体构建测序验证


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