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抗原修复液胰酶法

更新时间:2022-10-13

简要描述:

抗原修复液胰酶法
组织在制作过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原,又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来,为了解决上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。

抗原修复液胰酶法

在免疫组化染色后的镜下观察中,有发现这样的结果,阳性物反应不强,时隐时现,表达不均匀,有时可出现假阴性,这是因为:
1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定簇。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的,因为它能和多种不同的功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用,因为它是一种聚合固定剂,因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。
2. 甲醛在保存进程中会形成羟甲基,也可封闭抗原决定簇。据French和Edsall的研究认为,遇到的甲醇反应,就是加到一个含反应性氢原子的化合物中,形成一个羟甲基化合物。
3.在组织固定过程中,甲醛与蛋白质发生交联,形成醛交联蛋白,这种化合物封闭了抗原,使之无法表达出来。
为了解决上述存在的问题,更好地暴露出抗原,将其很好地显示出来,*的方法就是必须进行抗原修复。
至今为止,抗原修复有许多种方法,在这些方法中,有的是根据抗体的要求来进行,有的是根据抗原的表达程度来进行,我们则对每种病例每项检测,都要求必须进行抗原修复,以达到抗原全面表达的状态。

抗原修复液胰酶法使用方:

切片脱蜡水化,将100-200μl抗原修复液加至玻片上覆盖组织,37℃ 10-15分钟后(室温条件下时间适当延长),PBS洗3次,随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。


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