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刚果红染色

更新时间:2022-10-13

简要描述:

刚果红染色法特指纤维素的染色法,刚果红能把纤维素染成红色复合物,对纤维二糖和葡萄糖无作用,可用此来鉴别纤维素或纤维素分解菌的分解作用

原理:
刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红——纤维素的复合物便没法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌

方法:
常用的刚果红染色法有两种
方法一,先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应
在长出菌落的培养基上,覆盖质量浓度为1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min后,倒去CR溶液,加入物质的量浓度为l mol/l的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此时,产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。
(加NaCl的原因:刚果红是结合到培养基的多糖底物,但分解纤维素的细菌可以产纤维素酶,能分解这个多糖底物成为寡糖,这样刚果红就不能结合上去了,氯化钠就可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纤维素的能力就强)


方法二,在倒平板时就加入刚果红
配制质量浓度为10 mg/mI的CR溶液,灭菌后,按照每200 mI。培养基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混匀后倒平板。等培养基上长出茵落后,产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈 [1]


两种刚果红染色法的比较 : 刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史,课本中给出了两种方法。
方法一是传统的方法,
优点:这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。
缺点:操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂;
方法二
优点:操作简便,不存在菌落混杂问题,
缺点1:由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,因为培养基中纤维素占主要地位,因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。
缺点2:有些微生物具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分


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