细胞活力检测

更新时间：2022-10-13

简要描述：

细胞活力检测
tunel细胞凋亡检测服务利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）将脱氧核糖核苷酸-荧光素偶联物标记到DNA缺口的3'-末端。试剂盒提供实验所需的全套试剂组分以及优化的实验方案，检测方便，且适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。荧光信号易于被检测（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，化学名称： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

　　细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3‘-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端，从而可进行凋亡细胞的检测。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。所以通过TUNEL法，即基因片段末端标记（Fragment End Labeling, FragEL）从而可进行凋亡细胞的检测。

　　TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (橙红荧光) 利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）将脱氧核糖核苷酸-荧光素偶联物标记到DNA缺口的3'-末端。试剂盒提供实验所需的全套试剂组分以及优化的实验方案，检测方便，且适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。荧光信号易于被检测（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　细胞活力检测操作步骤

　　1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔。

　　2.一定条件培养细胞适当时间，至细胞单层铺满96孔平底板,加入浓度梯度的药物。

　　3.适当条件培养适当时间，倒置显微镜下观察。

　　4.每孔加入10ul MTT溶液，继续培养1-4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

　　5.终止培养，小心吸去孔内培养液。

　　6.每孔加入100ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

　　活力计算：

　　细胞活力（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）]×100

　　A（加药）：具有细胞、MTT溶液和药物溶液的孔的吸光度

　　A（空白）：具有培养基和MTT溶液而没有细胞的孔的吸光度

　　A（0加药）：具有细胞、MTT溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

　　细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

　　tunel细胞凋亡检测服务应用范围

　　1.抗肿瘤药物筛选

　　2.细胞毒性试验

　　3.肿瘤放射敏感性测定

　　细胞活力检测服务期限

　　1-2周。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家专注于生物科技前沿技术研发和科研技术服务的公司，公司建有专业的分子生物学、细胞生物学、组织病理学实验室，为众多生物医药企业、科研机构、医院及高校提供分子生物学、细胞生物学、病理形态学等方面科研服务。公司核心团队曾在国内外许多优秀学府从事过多年研发工作，秉承“为客户创造价值，为员工实现梦想，为社会创造财富"的经营理念，坚持以技术创新为先导，以服务质量为根本，为中国生物医药和科学研究提供优质的产品和技术服务。

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