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细胞活力检测

更新时间:2024-09-26

简要描述:

细胞活力检测
tunel细胞凋亡检测服务利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)将脱氧核糖核苷酸-荧光素偶联物标记到DNA缺口的3'-末端。试剂盒提供实验所需的全套试剂组分以及优化的实验方案,检测方便,且适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。荧光信号易于被检测(Ex/Em = 555nm/565 nm)。

  MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化学名称: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

  细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3‘-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端,从而可进行凋亡细胞的检测。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。所以通过TUNEL法,即基因片段末端标记(Fragment End Labeling, FragEL)从而可进行凋亡细胞的检测。
  TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒 (橙红荧光) 利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)将脱氧核糖核苷酸-荧光素偶联物标记到DNA缺口的3'-末端。试剂盒提供实验所需的全套试剂组分以及优化的实验方案,检测方便,且适用于荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪。荧光信号易于被检测(Ex/Em = 555nm/565 nm)。
  细胞活力检测操作步骤
  1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔。
  2.一定条件培养细胞适当时间,至细胞单层铺满96孔平底板,加入浓度梯度的药物。
  3.适当条件培养适当时间,倒置显微镜下观察。
  4.每孔加入10ul MTT溶液,继续培养1-4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。
  5.终止培养,小心吸去孔内培养液。
  6.每孔加入100ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
  活力计算:
  细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100
  A(加药):具有细胞、MTT溶液和药物溶液的孔的吸光度
  A(空白):具有培养基和MTT溶液而没有细胞的孔的吸光度
  A(0加药):具有细胞、MTT溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
  细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
  tunel细胞凋亡检测服务应用范围
  1.抗肿瘤药物筛选
  2.细胞毒性试验
  3.肿瘤放射敏感性测定
  细胞活力检测服务期限
  1-2周。


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