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RACE技术

更新时间:2021-12-15

简要描述:

RACE技术是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法, 又被称为锚定 PCR (anchoredPCR)和单边PCR(one2side PCR)。

RACE技术实验原理

      RACE技术是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法, 又被称为锚定 PCR (anchoredPCR)和单边PCR(one2side PCR)。

3'RACE

利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准*链cDNA.然后用一个基因特异引物GSP1(gene specific primer,GSP)作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为下游引物,以cDNA*链为模板,进行PCR循环,把目的基因3' 末端的基因片

段扩增出来。



5'RACE

先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准*链cDNA.利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到*链的5'末端时自动加上3-5个(dC)残基,退火后(dC)残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接头引物配对后,转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头(见Figure 2 )。然后用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为上游引物,用一个基因特异引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作为下游引物,以SMART*链cDNA为模板,进行PCR循环,把目的基因5'末端的c基因 片段扩增出来。终,从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长cDNA,或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列,合成相应引物扩增出全长cDNA。



实验流程:

1、总RNA提取以及cDNA反转录

2、根据已知序列设计引物,以cDNA模板进行扩增,验证序列正确性

3、RACE 扩增,并测序,使用锚定PCR(AnchoredPCR)与巢式PCR(Nested PCR)相结合的方法,分别进行3'末端和5'末端RACE并对其产物进行测序

4、根据测序结果拼接目的基因全长cDNA序列

5、将RACE产物进行TA克隆用于后续研究(可根据客户要求自行选择)

服务优势

采用进口试剂,确保实验准确性

较同类产品方法更快速,便捷

丰富的项目经验,超过500例的成功案例

提供全套的后续生物信息学分析服务(可根据客户要求提供个性化分析服务)

服务流程

1、确认客户提供的序列信息

2、评估RACE实验可行性

3、确认样本信息

4、根据客户提供的信息设计好实验方案,销售做出报价合同

4、客户确定无误后签订《沃森生物-RACE检测服务合同》,并签字(或盖章)

5、支付预付款,服务正式启动

6、根据合同实验方案开展实验

8、实验结束后,发送初步实验报告

9、支付实验尾款

10、提供详细实验报告,完成实验项目

材料提交说明

实验样品

1、组织或者细胞:提供尽可能多的新鲜组织或细胞样品(包括3个技术重复),组织样品不少于200 mg,细胞至少107个

2、RNA样品:3’ RACE:Total RNA>15μg;5’ RACE:Total RNA>25μg(注:OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好)

序列信息:

1、大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’ 端及3’ 端):如果已知序列比较短,建议先进行3’ RACE再进行5’ RACE,以提高实验的成功率

2、实验数据和参考文献:这将会帮助我们更好地理解您的实验背景,有利于实验的顺利进行

结果交付

实验结题报告:包括实验步骤,引物信息,实验过程 PCR产物照片,全长序列拼接结果;

测序原始数据:测序彩色波形图、碱基序列图;

实验产物:引物、PCR产物、测序用质粒(限产生克隆测序的情况)。


毓秀生物科技(上海)有限公司是一家专注于生物科技前沿技术研发和科研技术服务的公司,公司建有专业的分子生物学、细胞生物学、组织病理学实验室,为众多生物医药企业、科研机构、医院及高校提供分子生物学、细胞生物学、病理形态学等方面科研服务。公司核心团队曾在国内外许多优秀学府从事过多年研发工作,秉承“为客户创造价值,为员工实现梦想,为社会创造财富"的经营理念,坚持以技术创新为先导,以服务质量为根本,为中国生物医药和科学研究提供优质的产品和技术服务。



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