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ELISA检测

更新时间:2022-10-13

简要描述:

ELISA检测又称酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

  ELISA检测有多种样式,有间接法ELISA检测,夹心法ELISA检测,竞争法ELISA检测等,不同的ELISA检测有不同的流程以及对样品有不同的要求。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。


间接法ELISA检测

  用特异性抗原包被固相载体,加入待测的抗体样品反应后,再加入酶标二抗,经底物显色后测定。间接法ELISA需要客户提供待检测样本和包被用的抗原。


实验流程:

  1. 将抗原吸附于固相载体表面;

  2. 加待检抗体,形成抗原-抗体复合物;

  3. 加酶标抗体(抗抗体);

  4. 加入底物;

  5. 结果判定:有色产物的生成量=抗体量。


夹心法ELISA检测

  用*抗原或抗体包被固相载体,加入待测的抗体或抗原反应后,再加入酶标的第二抗原或抗体,经底物显色后测定,即可计算出待测抗原的量。此方法所用抗原一般为大分子抗原,如蛋白等,不适用于多肽等半抗原。夹心法ELISA需要客户提供待检测标本和成对抗原或抗体(亦可由我们购买或制备抗体)。


实验流程:

  1. 将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质;

  2. 加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时问,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物;

  3. 加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合;

  4. 加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。


竞争法ELISA检测

  用特异性抗体包被固相载体,同时加入酶标抗原和待测抗原的混合物样本,待测抗原将与酶标抗原竞争与固相上抗体结合。经底物显色后测定,计算两组数值之差即可推出待测抗原的量。此方法常用于测定小分子抗原。竞争法ELISA需要客户提供待检测标本、包被抗体和酶标抗原(亦可由我们购买或制备抗原或抗体)。

  

实验流程:

  1. 将抗体吸附在固相载体表面;

  2. 加入酶标抗原和待测抗原;

  3. 加入底物;

  4. 结果判定:对照孔与样品孔有色产物的生成量的差与未知抗原的量成负相关。

  

样品要求:

  1. 客户需提供待检测抗体(也可由我们代购)和包被用抗原。;

  2. 检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时,样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

  3.样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足提供500ul以上。


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