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ELISA检测按这六步来
发布时间:2021-01-22   点击次数:661次
   ELISA检测是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。
  组织样本:肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆;原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
  ELISA检测详细步骤如下:
  1.标本的采取和保存
  可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。
  2.试剂的准备
  按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。
  3.加样
  在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。
  4.保温
  在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。
  5.洗涤
  洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。
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