新闻中心您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 定量Q-PCR-ELISA检测技术的相关原理讲解
定量Q-PCR-ELISA检测技术的相关原理讲解
发布时间:2019-03-14   点击次数:214次
   定量Q-PCR-ELISA检测技术的相关原理讲解
  定量Q-PCR-ELISA检测技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。可用于mRNA、microRNA、lncRNA等基因表达量的检测。
  类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
  1.模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
  2.模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,在温度降至55℃左右时,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
  3.引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2-4分钟,在一个由计算机控制的循环加热器上经过三十个循环,就可以把原来的样品精确地扩增了2的30次方倍。扩增产物的量可用下列公式表示:C=C0(1+P)n。
  其中:C为扩增产物量,C0为起始DNA量,P为扩增效率,n为循环次数。
  在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应,减少非特异性产物。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
  每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量可增加一倍(理论上)。对于某些扩增片段很短的PCR反应,即使Taq酶活性不是zui佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。
毓秀生物科技(上海)有限公司

毓秀生物科技(上海)有限公司

工厂地址:上海市江月路999弄12-302室

毓秀生物科技(上海)有限公司(ww.yuxiubio.com)版权所有  备案号:沪ICP备19003469号-1  总访问量:25666  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆

QQ在线客服
联系方式

13917336314

021-26018223